HPLC e espectrometria de massa, explicados
O que a porcentagem de pureza realmente mede, o que a espectrometria de massa adiciona e os limites de ambos.
HPLC: separando e medindo
A cromatografia líquida de alta performance (HPLC) separa os componentes de uma amostra. Um detector, geralmente UV em torno de 214–220 nm para peptídeos, desenha um cromatograma: cada pico é um componente. A pureza é a área do pico principal dividida pela área total de todos os picos.
Espectrometria de massa: confirmando a identidade
A espectrometria de massa (MS) mede a massa das moléculas. Se a massa medida corresponder à massa teórica da sequência esperada, a identidade do composto é confirmada. A HPLC sozinha não pode dizer qual molécula é o pico principal.
O que a pureza não lhe diz
Uma pureza HPLC de 99 % não significa que o pó seja 99 % peptídeo. Peptídeos liofilizados também contêm água e contra-íons (como acetato ou trifluoroacetato). A quantidade de peptídeo real é chamada de conteúdo líquido de peptídeo e é medida separadamente.