HPLC und Massenspektrometrie, erklärt
Was der Reinheitsprozentsatz wirklich misst, was die Massenspektrometrie hinzufügt und die Grenzen beider Methoden.
HPLC: Trennen und Messen
Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) trennt die Bestandteile einer Probe. Ein Detektor, in der Regel UV bei etwa 214–220 nm für Peptide, zeichnet ein Chromatogramm: jeder Peak ist ein Bestandteil. Die Reinheit ist die Fläche des Hauptpeaks geteilt durch die Gesamtfläche aller Peaks.
Massenspektrometrie: Identität bestätigen
Die Massenspektrometrie (MS) misst die Masse der Moleküle. Wenn die gemessene Masse mit der theoretischen Masse der erwarteten Sequenz übereinstimmt, wird die Identität der Verbindung bestätigt. HPLC allein kann nicht sagen, welches Molekül der Hauptpeak ist.
Was die Reinheit nicht verrät
Eine HPLC-Reinheit von 99 % bedeutet nicht, dass das Pulver zu 99 % aus Peptid besteht. Gefriergetrocknete Peptide enthalten auch Wasser und Gegenionen (wie Acetat oder Trifluoracetat). Die Menge an tatsächlichem Peptid wird als Netto-Peptidgehalt bezeichnet und separat gemessen.