HPLC y espectrometría de masas, explicadas
Qué mide realmente el porcentaje de pureza, qué aporta la espectrometría de masas y los límites de ambos.
HPLC: separación y medición
La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) separa los componentes de una muestra. Un detector, generalmente UV alrededor de 214–220 nm para péptidos, dibuja un cromatograma: cada pico es un componente. La pureza es el área del pico principal dividida por el área total de todos los picos.
Espectrometría de masas: confirmación de identidad
La espectrometría de masas (MS) mide la masa de las moléculas. Si la masa medida coincide con la masa teórica de la secuencia esperada, se confirma la identidad del compuesto. La HPLC sola no puede indicar cuál molécula es el pico principal.
Qué no te dice la pureza
Una pureza HPLC del 99 % no significa que el polvo sea un 99 % péptido. Los péptidos liofilizados también contienen agua y contraiones (como acetato o trifluoroacetato). La cantidad de péptido real se denomina contenido neto de péptido y se mide por separado.