HPLC et spectrométrie de masse, expliqués
Ce que mesure réellement le pourcentage de pureté, ce que la spectrométrie de masse apporte, et les limites des deux.
HPLC : séparation et mesure
La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) sépare les composants d'un échantillon. Un détecteur, généralement UV autour de 214–220 nm pour les peptides, trace un chromatogramme : chaque pic est un composant. La pureté est la surface du pic principal divisée par la surface totale de tous les pics.
Spectrométrie de masse : confirmation de l'identité
La spectrométrie de masse (MS) mesure la masse des molécules. Si la masse mesurée correspond à la masse théorique de la séquence attendue, l'identité du composé est confirmée. L'HPLC seule ne peut pas indiquer quelle molécule correspond au pic principal.
Ce que la pureté ne vous dit pas
Une pureté HPLC de 99 % ne signifie pas que la poudre est composée à 99 % de peptide. Les peptides lyophilisés contiennent également de l'eau et des contre-ions (tels que l'acétate ou le trifluoroacétate). La quantité de peptide net est appelée teneur en peptide net et est mesurée séparément.