HPLC e spettrometria di massa, spiegati
Cosa misura realmente la percentuale di purezza, cosa aggiunge la spettrometria di massa e i limiti di entrambe.
HPLC: separazione e misurazione
La cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) separa i componenti di un campione. Un rivelatore, solitamente UV intorno a 214–220 nm per i peptidi, disegna un cromatogramma: ogni picco è un componente. La purezza è l'area del picco principale divisa per l'area totale di tutti i picchi.
Spettrometria di massa: conferma dell'identità
La spettrometria di massa (MS) misura la massa delle molecole. Se la massa misurata corrisponde alla massa teorica della sequenza attesa, l'identità del composto è confermata. L'HPLC da sola non può dire quale molecola sia il picco principale.
Cosa non dice la purezza
Una purezza HPLC del 99 % non significa che la polvere sia al 99 % peptide. I peptidi liofilizzati contengono anche acqua e contro-ioni (come acetato o trifluoroacetato). La quantità di peptide effettivo è chiamata contenuto netto di peptide e viene misurata separatamente.